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液相色譜法檢測(cè)牛奶分析研究

2010-08-16

隨著抗生素在乳畜飼養(yǎng)業(yè)中的廣泛應(yīng)用,牛奶中抗生素殘留問題日趨受到社會(huì)的重視。對(duì)此,檢測(cè)技術(shù)也迅速發(fā)展,以尋求簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確、敏感性高的檢測(cè)方法滿足日趨嚴(yán)格的殘留*的要求,保障人們飲用牛奶的衛(wèi)生和安全?! ?  

    1 牛奶中抗生素殘留的來源及其危害

1 .1牛奶中抗生素殘留的危害      
    牛奶是老少皆宜的營(yíng)養(yǎng)品,牛奶中若含有抗生素,對(duì)長(zhǎng)期飲用者來說無疑是等于長(zhǎng)期服用小劑量的抗生素,對(duì)抗生素有過敏體質(zhì)的人服用殘留抗生素的乳后會(huì)發(fā)生過敏反應(yīng)。即使是正常飲用者,體內(nèi)的某些條件性致病菌易產(chǎn)生耐藥性,一旦患者再用同種抗生素治療很難奏效。

    這又促使臨診獸醫(yī)在治療過程中加大抗生素的用量。此外,牛奶中抗生素殘留會(huì)影響奶制品的品質(zhì),如果用含抗生素的奶做酸奶或乳酪等,則殘留在其中的抗生素會(huì)抑制細(xì)菌的發(fā)酵,使產(chǎn)量和質(zhì)量降低。因此市場(chǎng)不允許出售抗生素殘留過量的牛奶,這樣也造成牛奶生產(chǎn)者的經(jīng)濟(jì)損失?!   ?br />    1.2 牛奶中抗生素殘留的來源      
    一般認(rèn)為,對(duì)泌乳牛用藥不當(dāng)或不注意安全時(shí)間是牛乳中抗生素殘留的重要因素,尤其是使用乳房灌注法治療乳腺炎時(shí),易造成牛乳中抗生素殘留。隨著畜牧業(yè)的發(fā)展,在牛飼料中添加飼料添加劑已十分廣泛,其中含量有一定比例的抗生素,主要作用是預(yù)防疾病的發(fā)生,這也是牛乳抗生素殘留重要原因。此外,在高溫季節(jié),一些不法交奶戶為防止乳的酸敗,往往向牛乳中摻雜各種抗生素,這也是乳中抗生素殘留的一個(gè)來源。  
 
    2 牛奶中的抗生素殘留檢測(cè)方法研究進(jìn)展   
    2.1微生物檢測(cè)法   
    微生物檢測(cè)法是應(yīng)用較廣泛的方法,如紙片法、TTC法等等,因其測(cè)定原理基于抗生素對(duì)微生物的生理機(jī)能、代謝的抑制作用,因而與臨床應(yīng)用的要求一致,但其測(cè)定時(shí)間長(zhǎng)且結(jié)果誤差較大。目前趨向靈敏、準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便、快速的微生物檢測(cè)方法研究,如酶標(biāo)抗體檢測(cè)法等?! ?br />    2.1.1紙片法   
    紙片法,即PD法(Paper Disc)。常用的紙片法有枯草桿菌紙片法和嗜熱脂肪桿菌紙片檢測(cè)法。這兩種方法主要用來檢測(cè)牛奶中的β-內(nèi)酰胺類抗生素,其操作過程基本相同,而選用的菌種不同??莶輻U菌紙片法檢測(cè)的結(jié)果易出現(xiàn)假陽性,為了確定陽性物質(zhì)是否為青霉素(或β-內(nèi)酰胺類),對(duì)加熱后的乳樣用青霉素酶處理,以滅活乳樣中的青霉素。然后再行檢測(cè),檢測(cè)限可達(dá)0.01IU/mL。而嗜熱脂肪桿菌紙片檢測(cè)法不僅用于檢測(cè)奶樣中β-內(nèi)酰胺類抗生素,并能暗示是還存在其他抑菌物質(zhì),檢測(cè)限可達(dá)0.008IU/mL以下。一般在4h內(nèi)即可獲得有關(guān)乳中是還存在β-內(nèi)酰胺抗生素殘留的結(jié)果。因此,在實(shí)踐中,嗜熱脂肪桿菌紙片法在奶樣的檢測(cè)中比枯草桿菌紙片法應(yīng)用更為廣泛。1991年,神保勝彥對(duì)紙片法作了進(jìn)一步研究和改進(jìn)。改進(jìn)后的方法不僅能夠確定抗生素的種類,而且提高了檢出率和準(zhǔn)確率,對(duì)氯霉素更低檢出量0.01ppm,土霉素0.05ppm,鏈霉素1ppm,紅霉素0.05ppm,青霉素0.0025ppm。 
    2.1.2 TTC法   
    TTC法,即氯化三苯基四氮唑法( tripheye tetrazolium chloride),這是目前我國(guó)食品衛(wèi)生標(biāo)淮中規(guī)定的檢查牛乳中抗生素殘留的檢測(cè)方法(GB5409?85)。如果牛乳中有抗生素存在,當(dāng)乳中加入菌種(嗜熱鏈球菌)經(jīng)培養(yǎng)后,菌種不增殖,此時(shí)加入的TTC指示劑不發(fā)生還原反應(yīng),所以仍呈無色狀態(tài);如果沒有抗生素存在,則加入菌種即行增殖,TTC還原變成紅色,使樣品染成紅色,即牛乳的顏色不變?yōu)殛栃?,染成紅色為陰性。檢測(cè)各種抗生素的靈敏度(更低檢出量):青霉素0.004U/ml,鏈霉素0.5 U/ml,慶大霉素0.4 U/ml,卡那霉素5 U/ml。   
    一些文獻(xiàn)報(bào)道了我國(guó)標(biāo)TTC法測(cè)定的我國(guó)部分地區(qū)市售牛乳中抗生素殘留的情況。1988年,周樹南[6]對(duì)江蘇省8市10個(gè)牧場(chǎng)生奶、消毒牛奶和奶粉中抗生素殘留情況進(jìn)行調(diào)查,結(jié)果發(fā)現(xiàn)生奶陽性率3.6%,消毒牛奶11.4%,奶粉39.58%。

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