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有效液相色譜儀系統(tǒng)是解決生化分析的有效途徑

2020-02-26

由于有效液相色譜儀具有高分辨率、高靈敏度、速度快、色譜柱可反復(fù)利用,流出組分易收集等眾多優(yōu)點(diǎn),因而被廣泛應(yīng)用到生物化學(xué)、食品分析、醫(yī)藥研究、環(huán)境分析、無機(jī)分析等各種領(lǐng)域??梢灶A(yù)見的是有效液相色譜儀與結(jié)構(gòu)儀器的聯(lián)用是一個重要的發(fā)展方向。

 

液相色譜儀

 

一、有效液相色譜儀檢測特點(diǎn)

有效液相色譜儀只要求樣品能制成溶液,不受樣品揮發(fā)性的限制,流動相可選擇的范圍寬,固定相的種類繁多,因而可以分離熱不穩(wěn)定和非揮發(fā)性的、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質(zhì)。與試樣預(yù)處理技術(shù)相配合,HPLC所達(dá)到的高分辨率和高靈敏度,使分離和同時測定性質(zhì)上十分相近的物質(zhì)成為可能,能夠分離復(fù)雜相體中的微量成分。隨著固定相的發(fā)展,有可能在充分保持生化物質(zhì)活性的條件下完成其分離HPLC成為解決生化分析問題*有前途的方法。液相色譜-質(zhì)譜連用技術(shù)受到普遍重視,如分析氨基甲酸酯農(nóng)藥和多核芳烴等;液相色譜-紅外光譜連用也發(fā)展很快如在環(huán)境污染分析測定水中的烴類,海水中的不揮發(fā)烴類,使環(huán)境污染分析擁有新的發(fā)展。

 

液相色譜儀

 

二、有效液相色譜儀分析的流程

由高壓泵將儲液瓶中的溶劑吸入色譜系統(tǒng),然后輸出,經(jīng)流量與壓力測量之后,導(dǎo)入進(jìn)樣器。被測物由進(jìn)樣器注入,并隨流動相通過色譜柱,在柱上進(jìn)行分離后進(jìn)入檢測器,檢測信號由數(shù)據(jù)處理設(shè)備采集與處理,并記錄色譜圖,廢液流入廢液瓶。遇到復(fù)雜的混合物分離(極性范圍比較寬)還可用梯度控制器作梯度洗脫。這和氣相色譜的程序升溫類似,不同的是氣相色譜改變溫度,而有效液相色譜儀改變的是流動相極性,使樣品各組分在**條件下得以分離。

1、*,液體對于氣體是有一定的溶解度的。液體的壓力越高,對氣體的溶解度越好。所以,當(dāng)一瓶未開封靜置的可樂,你是看不到氣泡的,因?yàn)闅馀荻既芙庠诶锩媪?。?dāng)你開啟瓶蓋,直接的影響就是瓶子里面的壓力降低了,對氣體的溶解度變小,所以氣體就析出變成一個個的小氣泡。

2、喝過啤酒或者碳酸飲料的人都有這樣的經(jīng)歷,當(dāng)你搖晃瓶子,然后瞬間把瓶蓋開啟,啤酒或碳酸飲料瓶中會噴出大量泡沫,搖晃的越劇烈,噴射的越猛,不難看出,溶解氣體的液體在振蕩和運(yùn)動過程中,也容易讓氣泡析出。

3、我們曾經(jīng)懷疑過一個問題:把一升甲醇倒進(jìn)一生純水里面,有效液相色譜儀的體積是不是兩升?當(dāng)我們親自試驗(yàn)后,就排除了這個疑問,而且我們可以明顯看到,當(dāng)兩種液體混合的時候,會有大量的氣泡冒出,體積也小于兩升。

 

液相色譜儀

 

三、有效液相色譜的研究動向

1、縮短分析時間,提高分離效率。應(yīng)用先進(jìn)的檢測儀器和方法,對流動相、固定相進(jìn)行調(diào)節(jié)或改變,采用梯度洗脫、柱切換技術(shù)有望解決這個問題。梯度洗脫的有效液相色譜法,能分析較寬極性范圍的樣品,較等度洗脫具有很大的優(yōu)勢,但對于成分更復(fù)雜、極性范圍更寬的中藥樣品則有些力不從心。多柱有效液相色譜法又稱多維有效液相色譜法。除具有梯度洗脫一樣的改變流動相濃度的優(yōu)點(diǎn)外,還可以改變固定相種類、鍵合度、粒徑、柱長、柱徑等及流動相種類、濃度等。

2、進(jìn)一步向自動化、智能化及聯(lián)用技術(shù)上發(fā)展。液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用在國外已成為測定低濃度生物藥品中藥物及代謝物的**方法,LC-MS-MS法測定血漿中HIV-1蛋白酶,準(zhǔn)確有效,血漿中殘留的內(nèi)源性組份和其他藥物不干擾測定,既節(jié)省材料又節(jié)約時間。已經(jīng)應(yīng)用于體液、血漿、血清中的藥物分析。中藥復(fù)方注射液“清開靈”中的膽酸類物的分析采用液質(zhì)聯(lián)用,效果理想。有效液相色譜-核磁共振聯(lián)用在藥物分析方面的作用也更加清晰。新近提出的智能多柱有效液相色譜系統(tǒng)利用切換技術(shù)的模塊式分離性能,把樣品分塊的切換進(jìn)不同性質(zhì)的色譜柱,再用合適的流動相洗脫,全過程采用智能化自動控制,分析效果良好。

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