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　　一些會(huì)影響到液相色譜儀使用的影響因素，是我們這些液相色譜儀的使用者必須要知道的所以我們想介紹一下液相色譜儀常見的影響因素及解決方法，如果你有想法的話可以看一下。

　　由于液相色譜儀系統(tǒng)中氣泡的存在，會(huì)造成色譜圖上出現(xiàn)尖銳的噪聲峰，嚴(yán)重時(shí)會(huì)造成分析靈敏度下降;氣泡變大進(jìn)入流路或色譜柱時(shí)會(huì)使流動(dòng)相的流速變慢或不穩(wěn)定，使基線起伏。造成上述現(xiàn)象的主要原因有三條：一是流動(dòng)相溶液中往往因溶解有氧氣或混入了空氣而形成氣泡;二是系統(tǒng)開始工作時(shí)未能將流路中的空氣驅(qū)趕干凈;三是在注入樣品時(shí)不注意混入了空氣。

　　為了避免這類問題的出現(xiàn)，HPLC實(shí)際分析過程中必須重視對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行脫氣處理;在HPLC系統(tǒng)開始工作前，可以用注射器連接恒流泵的排空閥，抽入流動(dòng)相，將流路中的空氣驅(qū)趕干凈;在注入樣品前注意排出樣品注射器中的空氣。

　　柱溫

　　在操作HPLC時(shí)，色譜柱是在室溫環(huán)境下工作的。大多數(shù)的工作環(huán)境溫度是不斷變化的，溫度的差別就會(huì)引起較復(fù)雜的問題。溫度的影響在所有的色譜分析方式中都是存在的，HPLC方法中的洗脫方式受溫度的影響。

　　等度洗脫時(shí)溫度會(huì)影響保留時(shí)間，當(dāng)溫度升高時(shí)所有的色譜峰都前移了，等度洗脫時(shí)一般溫度每升高1℃，保留時(shí)間會(huì)縮短(1~3)%。溫度變化對(duì)梯度洗脫和等度洗脫的影響趨勢(shì)是一樣的。溫度變化對(duì)梯度洗脫的影響要小于對(duì)等度洗脫的影響。即便如此，若梯度洗脫時(shí)不控制溫度的話，保留值一般也會(huì)有較大的變化。溫度變化還可能引起選擇性顯著變化。

　　正如柱子不能*平衡將導(dǎo)致保留時(shí)間的重現(xiàn)性差一樣，柱溫不平衡也會(huì)導(dǎo)致不理想的后果，這個(gè)問題在峰寬上的影響尤其明顯。當(dāng)溫度變化時(shí)除了選擇性和保留時(shí)間的變化之外，峰寬也會(huì)發(fā)生變化。升高溫度通常會(huì)使理論塔板數(shù)升高，峰寬變窄，由于峰面積不變，峰越窄就會(huì)越高，因此升高溫度可以達(dá)到更小的檢測(cè)限。

　　柱子里的溫度變化也會(huì)影響峰形。當(dāng)流動(dòng)相和柱子之間的溫差增大時(shí)，由溫度不平衡而導(dǎo)致的峰變形就會(huì)加劇。

　　為了獲得一致的結(jié)果我們必須要控制柱溫，使用柱溫箱是好的辦法。如果沒有柱溫箱，有效的辦法就是將色譜柱隔絕在一個(gè)溫度波動(dòng)小的地方。

　　色譜柱污染

　　色譜柱污染會(huì)引起保留時(shí)間漂移。HPLC色譜柱是非常有效的吸附性過濾器，它可以過濾并吸附流動(dòng)相攜帶的任何物質(zhì)。污染源可能是：流動(dòng)相本身，流動(dòng)相容器，連接管、泵、進(jìn)樣器和儀器密封墊，以及樣品等。

　　樣品中如果存在色譜柱上保留很強(qiáng)的組分，就可能使保留時(shí)間漂移。通常樣品中的強(qiáng)保留組分具有較高的分子量，在此情況下，保留時(shí)間漂移的同時(shí)或其后會(huì)有反壓的增加?？梢酝ㄟ^使用固相提取等樣品前處理方法來去除樣品基質(zhì)的影響。

　　避免色譜柱污染簡(jiǎn)單的方法是防患于未然。相比之下，找到問題的所在并設(shè)計(jì)有效的清洗步驟以去除污染物要困難的多。通常使用在給定色譜條件下的強(qiáng)溶劑，但并非所有污染物都可以在流動(dòng)相中溶解。

　　使用保護(hù)柱是個(gè)非常有效的方法。反沖色譜柱僅是不得已時(shí)采用的辦法。

　　色譜柱平衡

　　如果我們觀察到保留時(shí)間漂移，首先應(yīng)考慮色譜柱是否已用流動(dòng)相*平衡。通常平衡需要10~20個(gè)柱體積的流動(dòng)相。但如果在流動(dòng)相中加入少量添加劑則需要相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間來平衡色譜柱。需要柱子的充分平衡，然后才能對(duì)HPLC進(jìn)行檢定。

　　流動(dòng)相有機(jī)溶劑

　　HPLC分析總要求使用HPLC純的試劑，關(guān)鍵是兩點(diǎn)：純度高、紫外吸收小。純度高，是希望沒有雜質(zhì)干擾HPLC分析;不會(huì)有金屬離子損害純度為99.99%以上的高純度硅膠基質(zhì)?？梢酝ㄟ^重蒸分析純?nèi)軇?或?yàn)V膜過濾，并定期把前置的過濾頭取下，放稀硝酸里清洗，再用純水洗至中性。

　　流動(dòng)相有機(jī)溶劑可能影響HPLC的檢測(cè)限。

　　柱壓

　　柱壓過高是HPLC分析中常碰到的問題。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的問題。溶劑或樣品含有顆粒雜質(zhì)，這些雜質(zhì)將篩板堵塞引起壓力上升，應(yīng)更換柱子入口篩板;泵內(nèi)有空氣，解決的辦法是清除泵內(nèi)空氣，對(duì)溶劑進(jìn)行脫氣處理;比例閥失效，應(yīng)更換比例閥;泵密封墊損壞，應(yīng)更換密封墊;系統(tǒng)檢漏，則找出漏點(diǎn)，密封即可。

　　液相色譜儀分析中，在色譜柱正常，樣品靈敏度足夠，分析方法合適，色譜峰在出峰時(shí)間較短的條件下，峰形應(yīng)對(duì)稱而尖銳。充分考慮到可能影響分析結(jié)果的因素，可以科學(xué)地進(jìn)行液相色譜儀的檢定。