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液相色譜儀的組成及分類

2019-05-28

對液相色譜儀如果不是對于它十分了解的客戶,應(yīng)該不知道它的組合成及分類所以我們?nèi)鹞鲂【帨?zhǔn)備介紹一下液相色譜儀的組成及分類,有興趣的話大家可以一起來了解一下。

液相色譜儀的組成及分類

1.高壓輸液系統(tǒng)

貯液裝置、高壓輸液泵、過濾器、脫氣裝置等

1.1.貯液器:貯液器用于存放溶劑。溶劑必須很純,貯液器材料要耐腐蝕,對溶劑呈惰性。貯液器應(yīng)配有溶劑過濾器,以防止活動相中的顆粒進進泵內(nèi)。溶劑過濾器一般用耐腐蝕的鎳合金制成,空隙大小一般為2mm。

1.2.脫氣裝置:脫氣的目的是為了防止活動相從高壓柱內(nèi)流出時,開釋出氣泡進進檢測器而使噪聲劇增,甚至不能正常檢測。

1.3.高壓輸液泵高壓輸液泵是液相色譜儀的重要部件,是驅(qū)動溶劑和樣品通過色譜柱和檢測系統(tǒng)的高壓源,其性能好壞直接影響分析結(jié)果的可靠性。

對高壓泵的基本要求是:

①流量穩(wěn)定;②輸出壓力高,更高輸出壓力為50Mpa;③流量范圍寬,可在0.01~10ml/min范圍任選。④耐酸、堿、緩沖液腐蝕。⑤壓力波動小。

1.2.梯度洗脫裝置梯度洗脫是利用兩種或兩種以上的溶劑,按照一定時間程序連續(xù)或階段地改變配比濃度,以達到改變活動相極性、離子強度或pH值,從而進步洗脫能力,改善分離的一種有效方法。當(dāng)一個樣品混合物的容量因子是范圍很寬,用等度洗脫時間太長,且后出的峰形扁平不便檢測時,用梯度洗脫可以改善峰形、并縮短分離時間。HPLC的梯度洗脫與GC的程序升溫相似,可以縮短分析時間,進步分離效果。使所有的峰都處于更佳分離狀態(tài),而且峰形尖而窄。

2進樣器

進樣器一般要求密封性好,死體積小,重復(fù)性好,保證中心進樣,進樣時對色譜系統(tǒng)的壓力和流量波動小,并便于實現(xiàn)自動化。

高壓進樣閥是目前廣泛采用的一種方式。閥的種類很多,有六通閥、四通閥,雙路閥等。以六通進樣閥更為常用。

3.分離系統(tǒng)

色譜分離系統(tǒng)包括色譜柱、固定相和活動相。色譜柱是其核心部分,柱應(yīng)具備耐高壓、耐腐蝕、抗氧化、密封不漏液和柱內(nèi)死體積小、柱效高、柱容量大、分析速度快、柱壽命長的要求。通常采用不銹鋼管制成。

色譜柱按內(nèi)徑不同可分為常規(guī)柱、快速柱和微量柱三類。

常規(guī)分析柱柱長一般為10~25cm,內(nèi)徑4~5mm,固定相顆粒直徑為5~10 mm。為了保護分析柱不受污染,一般在分析柱前加一短柱,約數(shù)厘米長,稱為保護柱。

(微量分析柱內(nèi)徑小于l mm,凝膠色譜往內(nèi)徑3~12 mm,制備往內(nèi)徑較大,可達25 mm以上。)

液相色譜儀的組成及分類

4檢測系統(tǒng)

檢測器的作用是將柱流出物中樣品組成和含量的變化轉(zhuǎn)化為可供檢測的信號,常用檢測器有紫外吸收、熒光、示差折光、化學(xué)發(fā)光等。

4.1.紫外可見吸收檢測器(ultraviolet-visible detector,UVD)

紫外可見吸收檢測器(UVD)是HPLC中應(yīng)用更廣泛的檢測器之一,幾乎所有的液相色譜儀都配有這種檢測器。其特點是靈敏度較高,線性范圍寬,噪聲低,適用于梯度洗脫,對強吸收物質(zhì)檢測限可達1ng,檢測后不破壞樣品,可用于制備,并能與任何檢測器串聯(lián)使用。紫外可見檢測器的工作原理與結(jié)構(gòu)同一般分光光度計相似,實際上就是裝有活動地的紫外可見光度計。

(1)紫外吸收檢測器:

紫外吸收檢測器常用氘燈作光源,氘燈則發(fā)射出紫外-可見區(qū)范圍的連續(xù)波長,并安裝一個光柵型單色器,其波長選擇范圍寬(190nm~800nm)。它有兩個流通池,一個作參比,一個作丈量用,光源發(fā)出的紫外光照射到流通池上,若兩流通池都通過純的均勻溶劑,則它們在紫外波長下幾乎無吸收,光電管上接受到的輻射強度相等,無信號輸出。當(dāng)組分進進丈量池時,吸收一定的紫外光,使兩光電管接受到的輻射強度不等,這時有信號輸出,輸出信號大小與組分濃度有關(guān)。

局限:活動相的選擇受到一定限制,即具有一定紫外吸收的溶劑不能做活動相,每種溶劑都有截止波長,當(dāng)小于該截止波長的紫外光通過溶劑時,溶劑的透光率降至10%以下,因此,紫外吸收檢測器的工作波長不能小于溶劑的截止波長

(2)光電二極管陣列檢測器(photodiode array detector,PDAD):

也稱快速掃描紫外可見分光檢測器,是一種新型的光吸收式檢測器。它采用光電二極管陣列作為檢測元件,構(gòu)成多通道并行工作,同時檢測由光柵分光,再進射到陣列式接收器上的全部波長的光信號,然后對二極管陣列快速掃描采集數(shù)據(jù),得到吸收值(A)是保存時間(tR)和波長(l)函數(shù)的三維色譜光譜圖。由此可及時觀察與每一組分的色譜圖相應(yīng)的光譜數(shù)據(jù),從而迅速決定具有更佳選擇性和靈敏度的波長。

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