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對(duì)于剛剛應(yīng)用液相色譜儀的人來說，一時(shí)很難弄清楚液相色譜儀的工作原理和保養(yǎng)知識(shí)因此我們?nèi)鹞鲂【帨?zhǔn)備介紹一下液相色譜儀的工作原理和保養(yǎng)知識(shí)大家感興趣的話可以了解一下。

液相色譜儀的工作原理

儲(chǔ)液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相，被流動(dòng)相載入色譜柱(固定相)內(nèi)，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中作相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí)，經(jīng)過反復(fù)多次的吸附-解吸的分配過程，各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別，被分離成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出，通過檢測(cè)器時(shí)，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號(hào)傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來。

液相色譜儀的保養(yǎng)

HPLC的日常操作條件：溫度：10～30℃；相對(duì)濕度小于80％；好是恒溫、恒濕，遠(yuǎn)離高電磁干擾、高振動(dòng)設(shè)備，有良好的通風(fēng)設(shè)施。

HPLC的環(huán)境設(shè)置：

HPLC用水可以通過以下幾個(gè)方面來得到：

1專門的純水機(jī)或超純水機(jī)；

2去離子水重蒸；

3二次或三次重蒸水；

4采用類似家用的純水機(jī)；

5市場(chǎng)上瓶裝的純凈水或蒸餾水；

6其它途徑；

不管采用何種途徑，配制流動(dòng)相應(yīng)用新鮮水，水質(zhì)越高放置時(shí)間越短。理想的HPLC用水應(yīng)為18.2Ω的超純水，并通過0.22um的濾膜，除去熱源、有機(jī)物、無機(jī)離子及空氣等。

HPLC六通閥進(jìn)樣器的使用及保養(yǎng)

六通閥進(jìn)樣器是液相色譜系統(tǒng)中理想的進(jìn)樣器，它是由圓形密封墊(轉(zhuǎn)子)和固定底座(定子)組成。美國(guó)Rheodyne公司的六通閥進(jìn)樣器為通用，各大HPLC儀器制造商均以此產(chǎn)品作為儀器的進(jìn)樣器。

工作原理：手柄位進(jìn)樣(Load)位置時(shí)，樣品經(jīng)微量進(jìn)樣針從進(jìn)樣孔注射進(jìn)定量環(huán)，定量環(huán)充滿后，多余樣品從放空孔排出；將手柄轉(zhuǎn)動(dòng)至進(jìn)樣(Inject)位置時(shí)，閥與液相流路接通，由泵輸送的流動(dòng)相沖洗定量環(huán)，推動(dòng)樣品進(jìn)入液相分析柱進(jìn)行分析。

雖然六通閥進(jìn)樣器具有結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、使用方便、壽命長(zhǎng)、日常無需維修等特點(diǎn)，但正確的使用和維護(hù)將能增加使用壽命，保護(hù)周邊設(shè)備，同時(shí)增加分析準(zhǔn)確度。如使用得當(dāng)?shù)脑?，六通閥進(jìn)樣器一般可連續(xù)進(jìn)樣3萬次而無需維修。手柄處于Load和Inject之間時(shí)，由于暫時(shí)堵住了流路，流路中壓力驟增，再轉(zhuǎn)到進(jìn)樣位，過高的壓力在柱頭上引起損壞，所以應(yīng)盡快轉(zhuǎn)動(dòng)閥，不能停留在中途。在HPLC系統(tǒng)中使用的注射器針頭有別于氣相色譜，是平頭注射器。一方面，針頭外側(cè)緊貼進(jìn)樣器密封管內(nèi)側(cè)，密封性能好，不漏液，不引入空氣；另一方面，也防止了針頭刺壞密封組件及定子。

六通閥進(jìn)樣器的進(jìn)樣方式有部分裝液法和*裝液法兩種。使用部分裝液法進(jìn)樣時(shí)，進(jìn)樣量多為定量環(huán)體積的75％，如20μl的定量環(huán)多進(jìn)樣15μl的樣品，并且要求每次進(jìn)樣體積準(zhǔn)確、相同；使用*裝液法進(jìn)樣時(shí)，進(jìn)樣量少為定量環(huán)體積的3至5倍，即20μl的定量環(huán)少進(jìn)樣60至100μl的樣品，這樣才能*置換樣品定量環(huán)內(nèi)殘留的溶液，達(dá)到所要求的精密度及重現(xiàn)性。推薦采用100ul的平頭進(jìn)樣針配合20ul滿環(huán)進(jìn)樣。

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